【研究分野】泌尿器科学

【研究領域課題番号】15591715 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

腎細胞癌 / サイトカイン / アポトーシス / NF-κB / C / EBP / AP-2 / MAPキナーゼ / Akt / EBP-β

【研究成果の概要】

サイトカインのシグナル伝達に関連した転写因子に着目して腎細胞癌の細胞生物学的特徴を明らかにした。一連の研究は腎細胞癌が頻繁に発熱や白血球増多症を伴い、サイトカイン産生性腫瘍であるという臨床的特性に対する分子基盤を与える研究と位置づけられる。腎細胞癌の組織においてはNF-κBの活性化は腫瘍の進展や転移と関連すること(Oya M et al : Carcinogenesis 2003)、CCAAT/enhancer binding protein(C/EBP)の活性化は腎細胞癌においてはβサブタイプに依存していること(Oya M et al : Clin Cancer Res 2003)を示した。これら2つの転写因子の活性化は癌の悪性度や浸潤と相関するのに対し、Activator protein 2(AP-2)は逆に早期の腎細胞癌に有意に活性化が見られることを示した(Oya M et al : Urology 2004)。さらに腎細胞癌のアポトーシスの誘導機構を利用して治療への応用を試みた。Mitogen-activated protein kinase(MAPK)とphosphatidylinositol-3-OH kinase(PI3K)-Akt経路の意義を中心に解析した。MAPKは主にERK,JNK,p38の経路に分類される。腎細胞癌においてはJNKの活性化を負に制御するフォスファターゼであるMKP-1の発現の亢進が存在し、JNKの活性化はすみやかに抑制されること、JNKの活性化を持続させることにより腎細胞癌においてアポトーシスが誘導されることを示した(Mizuno R et al : J Urol 2004)。また、プロテアソーム阻害剤が腎癌細胞にアポトーシスを誘導することを示した(Ishizawa J et al : Int J Oncol 2004)。PI3K-Akt経路の解析では免疫組織化学的手法にてAktの活性化が腎細胞癌の予後不良因子であることを示した(Horiguchi A et al : J Urol 2003)。これらの成果は分子標的治療への応用が期待される。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】2003 - 2004

【配分額】3,400千円 (直接経費: 3,400千円)

【研究分野】免疫学

【研究領域課題番号】14370109 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

胸腺 / マクロファージ / 樹状細胞 / アポトーシス / 上皮細胞 / T細胞 / サイトカイン / 抗原提示 / 免疫 / リンパ球

【研究成果の概要】

免疫系の中心的役割を担うT細胞は、胸腺において分化・成熟する。造血幹細胞からリンパ球系にコミットした前駆細胞は、胸腺に入りT細胞へと分化する。この分化のプロセスは詳細に研究されており、CD4-/CD8-のdouble negative (DN)胸腺細胞はCD4+/CD8+を経てCD4+/CD8-あるいはCD4-/CD8+のT細胞へと分化・成熟する。この間に、T細胞受容体(TCR)遺伝子の再構成が起こり、自己MHCを認識しないTCRを持つクローンおよび自己抗原に強いaffinityをもつクローンは排除される。しかし、通常の胸腺には細胞死を起こした細胞は頻繁には認められないことから、排除された胸腺細胞を迅速に処理する細胞の存在が考えられる。
本研究では、胸腺内にCD4陽性のマクロファージが存在することを認め、この細胞集団について検討を重ねた。CD4陽性マクロファージは蛍光ビーズあるいはアポトーシスを誘導した胸腺細胞を効率良く貪食する活性があり、その活性は胸腺内あるいは腹腔内の通常のCD4陰性マクロファージに比べてはるかに高いことが明らかになった。さらに、CD4陽性マクロファージは胸腺の発達とともに肥大化するが、Rag1欠損マウスではT細胞分化が起らず、したがって死細胞も生じないためにCD4陽性細胞の肥大化も認められなかった。これらの結果から、胸腺内のCD4陽性マクロファージはprofessionalなスカベンジャーであることが強く示唆させた。
このD4陽性マクロファージはT細胞の選択が起る髄質と皮質の境界領域に存在していた。この領域にはOncostatin M受容体が発現しており、胸腺細胞をOSM存在下に培養すると、OSM応答性の胸腺上皮細胞が得られた。この上皮細胞を未分化胸腺細胞と共培養すると、CD4陽性マクロファージが出現するとの結果が得られ、上皮細胞がCD4マクロファージ分化に重要であることが示された。OSMは生体内においてTECに直接作用し、胸腺構造の構築に寄与している可能性が変異マウスの解析から示された。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2002 - 2003

【配分額】13,900千円 (直接経費: 13,900千円)

【研究分野】麻酔・蘇生学

【研究領域課題番号】14571465 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

敗血症 / Nicorandil / 心機能 / 死亡率 / Working heart / サイトカイン / アポトーシス

【研究成果の概要】

これまで敗血症患者あるいはそのモデルの心筋保護により、心機能維持と死亡率を改善する治療法は確立されていなかった。そこで、臨床上の敗血症像に類似したラットCecal Ligation & Perforation(CLP)モデルを用い、早期よりnicorandilを投与した群と生食を投与したコントロール群を比較し、心機能を改善できるか、摘出心筋標本であるWorking Heart modelで検討した。さらに、nicorandilが、血中サイトカイン濃度、心筋細胞アポトーシス、死亡率に与える影響について検討した。
結果として、nicorandilの持続投与は、敗血症心筋の心機能を有意に高く維持し、CLP48時間後の死亡率を有意に減少させた。また、TNF-α、NOxの血中濃度を減少させた。IL1-β、macrophage migration inhibitory factor(MIF)の血中濃度には有意な差は見られなかった。一方、心筋細胞のアポトーシス数には、有意な差を生じなかった。
本研究により、nicorandilの持続投与は、ラット敗血症心筋の心機能を維持し、さらに生存率を改善することが示された。これには、nicorandilのサイトカイン放出抑制が関与する可能性が示唆された。nicorandilは、すでに臨床で使用されている薬剤であり、その安全性も確立している。敗血症に際しnicorandilの投与を行うことで、敗血症に対する新たな臨床的治療効果が期待される。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】2002 - 2003

【配分額】3,500千円 (直接経費: 3,500千円)

【研究分野】神経内科学

【研究領域課題番号】11670639 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

脳虚血 / 虚血性細胞傷害 / 転写因子 / 脳保護 / 情報伝達 / CREB / オリゴデンドロサイト / 白質 / サイクリックAMP / アポトーシス / 虚血性細胞障害 / サイトカイン / IL-6

【研究成果の概要】

平成11年度から13年度にわたって、ラット中大脳動脈閉塞モデルを用い脳虚血再灌流時における、大脳白質病変と転写因子cyclic AMP response element binding Protein (CREB)のリン酸化(活性化)の関係を、オリゴデンドロサイトの特異的マーカーを用い、TUNEL染色やBcl-2蛋白発現と共に、免疫組織学的に調べた。すなわち、白質が皮質よりも大きな容積をしめるヒト脳では大脳白質が脳梗塞において主な病変部位であることが大変多く、今後の血栓溶解療法や血流再開療法の施行に伴い、白質保護が益々重要な課題になってきているからである。CREBは種々の神経栄養因子の作用発現やBcl-2蛋白などの抗アポトーシス因子発現に関与し、神経細胞の発生、分化や再生、シナプス可塑性の維持など細胞保護的に機能することが注目されている。また、CREBはthioredoxin発現を調節することで酸化ストレス抑制にも重要な役割を果たしていることが明らかとなっている。実験の結果、代表的な大脳白質部位である脳梁の虚血周辺部では、再灌流24-48時間の時点で、オリゴデンドロサイト細胞核におけるCREBリン酸化の亢進の持続とともに、同細胞の細胞質でBcl-2発現は明らかに増大しかつTUNEL染色は陰性であり、Cresyl violet染色上、細胞の形態は正常に保たれていた。また、髄鞘染色上、髄鞘の密度や構造は正常に保たれていた。また、同部位のCREBリン酸化の明らかなオリゴデンドロサイトはニトロチロシン染色陰性であり、一酸化窒素やペロキシナイトライトを介した酸化ストレスを免れていた。一方、虚血中心部の脳梁では再潅流24-48時間の時点で、リン酸化CREBは全く検出されず、かつBcl-2も陰性化し、TUNEL染色は強陽性、ニトロチロシン染色陽性であり、オリゴデンドロサイトの傷害は明らかであった。また、髄鞘は明らかに非薄化していた。以上より、脳虚血再灌流時において、CREBリン酸化の持続が大脳白質のオリゴデンドロサイトや髄鞘に保護的に作用していることが明らかとなった。また、電位依存性Na^+/Ca^<2+>チャンネル阻害薬(NS-7)によって、本虚血モデルにおけるこれら細胞内情報伝達系障害が抑制され、梗塞巣が縮小化することが明らかとなり、今後の新しい治療への展望が開けてきた。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】1999 - 2001

【配分額】3,200千円 (直接経費: 3,200千円)

【研究分野】食品科学・製品科学

【研究領域課題番号】10306008 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

食品アレルギー / TCRアンタゴニズム / 変異ペプチドリガンド / 腸管免疫系 / サイトカイン / 神経細胞 / 一酸化窒素 / アポトーシス / アナログペプチド / 脳細胞 / T細胞 / 細胞死 / p53 / IgE / 神経幹細胞

【研究成果の概要】

1.アレルゲンの分子構造変化と免疫応答の関係 T細胞抗原レセプタートランスジェニック(TCR-Tg)マウスのT細胞が認識する卵白アルブミン(OVA)の部分ペプチドOVA323-339の1残基置換アナログ40種は、それが誘起するT細胞のサイトカイン応答や抗体産生誘導のパターンの違いにより、4つの群に分けることができた。同様のパターン変化はOVA323-339濃度の変化によっても観察された。さらに、T細胞応答を抑制するアナログも同定し、これの腹腔内投与はinvivo食品アレルギー反応モデルにおいて抑制効果を示すことを明らかにした。
2.アレルゲンと腸管免疫系の応答作用OVAを経口投与したTCR-Tgマウスのパイエル板細胞は抗原刺激に対しIFN-γ、IL-5を分泌し、腸管上皮内リンパ球はIFN-γを分泌した。一方、脾臓CD4T細胞のサイトカイン産生能は減弱し、経口免疫寛容が誘導された。この寛容T細胞において、TCR刺激に対する細胞内Ca^<2+>濃度の上昇等に障害が認められた。また、OVA経口投与により胸腺細胞、各リンパ組織のCD4T細胞のアポトーシスが観察され、p53欠損マウスにおいて抗体レベルの経口免疫寛容が部分的に解除された。パイエル板細胞の抗原提示能と脾臓細胞の抗原提示能の違いについて明らかにした。
3.腸管免疫系と神経系の相互作用 神経幹細胞の培養系を用い、神経系細胞に対するサイトカインの作用を解析した。IL-6ファミリーサイトカイン(IL-6,IL-11)およびTGF-βファミリーサイトカイン(BMP-2,BMP-4)の作用により、神経細胞の活動を補助するグリア細胞の新生が誘導された。また、免疫系のストレス応答により誘導型-酸化窒素合成酵素の発現が誘導され、結果的に周囲に存在する神経細胞が傷害され、場合によってはp53依存的にプログラム細胞死が誘起されることが判明した。

【研究種目】基盤研究(A)

【研究期間】1998 - 2000

【配分額】37,100千円 (直接経費: 37,100千円)

【研究分野】応用動物科学

【研究領域課題番号】10556061 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

interferon-γ / サイトカイン / interleukin-12 / ワクシニアウイルス / 組換えウイルス / Neospora caninum / Cryptosporidium parvum / タキゾイト / 寄生原虫 / インターフェロン / アポトーシス / IFN-γ / CHV / NcRS2 / IL-12 / p35 / p40 / IRES / ワクチニアウイルス / p7.5プロモータ / tunicamycin / N-linked糖鎖付加 / イヌヘルペスウイルス / INF-γ / LPS

【研究成果の概要】

1)イヌのinterferon-γ遺伝子をクローニングしてワクシニアウイルスゲノムに組み込んだ組み換えウイルスを構築し、このウイルスに感染した細胞中に生物活性を有するイヌのinterferon-γが発現していることを確認した。
2)細胞性免疫の誘導に重要な役割を果たすと考えられているサイトカイン、イヌinterleukin-12遺伝子をくろ-にんぐしてワクシニアウイルスゲノムに組み込んだ組み換えウイルスを構築し、このウイルスに感染した細胞中に生物活性を有するイヌのinterleukin-12が発現していることを確認した。
3)Neospora caninumタキゾイト表面タンパクNcSAG1及びNcSAG2を発現する組換えワクシニアウイルスを構築した。この組換えウイルスはNeospora caninumマウス感染モデルにおいて防御効果をもつことが明らかになった。防御効果はNcSAG2発現ワクシニアウイルスのほうがNcSAG1発現株より有効であった。
4)Neospora caninumタキゾイト表面タンパクNcSAG2を発現する組換えイヌヘルペスウイルスを構築した。この組換えウイル間接蛍光抗体法により感染細胞中に原虫NcSAG2と同様な構造をもつタンパクが発現されることが明らかになった。この組換え体を接種したイヌにおいて原虫表面抗原と反応する抗体が誘導された。
5)ウシヘルペスウイルス1型ゲノム内にCryptosporidium parvumスポロゾイト表面タンパクp23遺伝子を組み込んだ組換えウイルスを構築した。これをMDBK細胞に感染させ、Western blotting法にて解析した。原虫が発現するタンパクと同じ23kDaの分子量を持つタンパクの発現が確認された。ウサギに接種するとp23に対する高い抗体価を持つIgGが得られた。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 2000

【配分額】12,800千円 (直接経費: 12,800千円)

【研究分野】免疫学

【研究領域課題番号】09044264 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

サイトカイン / サイトカイン受容体 / シグナル伝達 / アポトーシス / 造血 / 生殖細胞 / 血管内皮細胞 / 発生 / オンコスタチンM / 血管内皮 / セルトリ細胞 / 始原生殖細胞 / 細胞増殖 / 細胞分化 / 細胞死 / 白血病

【研究成果の概要】

造血細胞の生存はサイトカインに依存しており、サイトカイン除去により細胞死が誘導される。我々はすでにこのサイトカインによる細胞死抑制機能にはサイトカインにより活性化されるRASが重要であることを示した。そこで、RASの変異体を用いてRAS下流のシグナル経路の解析を行い、RASはRAF/MAPキナーゼ経路とPI3キナーゼ経路の両方を介して細胞死を抑制していることを明かにした。一方、サイトカイン非存在下ではCaspase-3が活性化され、それがサイトカイン除去に伴う細胞死に重要であることも明らかにした。また、我々はサイトカインで誘導される分子としてオンコスタチンM(OSM)を同定していたので、その機能を検索した。造血発生の場として知られている胎生期のAGM(aorta/gonad/mesonephros)領域にOSMの発現を認め、マウスAGM領域の細胞を培養する系にてOSMが血球産生と血管内皮細胞の増殖を促進することを見いだし、OSMが血球と血管内皮に共通の前駆細胞hemangioblastsに作用する可能性を示した。さらに、この培養系を用いて、血球産生に必須な転写因子c-myb,AML-1の作用を解析した。また、OSMは生殖細胞とセルトリ細胞にも作用することを見いだした。さらに、マウスOSM受容体の生化学的解析およびマウスOSM受容体遺伝子クローニングにより、機能的な受容体の分子構造を明らかにし、ヒトOSMとの相違を明らかにした。

【研究種目】国際学術研究

【研究期間】1997 - 1998

【配分額】5,500千円 (直接経費: 5,500千円)

【研究分野】外科学一般

【研究領域課題番号】09470245 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

好中球 / アポトーシス / ネクローシス / 感染 / サイトカイン / 活性酸素 / 成長ホルモン / CD16 / 炎症性メジエータ / 外科侵襲 / 細胞死 / apoptosis / necrosis / 接着分子

【研究成果の概要】

本研究は、炎症・感染における好中球細胞死とその炎症遷延・臓器障害発生における役割の詳細を明らかにし、さらに重症炎症・感染時の好中球ネクローシス防止、アポトーシス誘導などの対策を開発することを目的とする。本年度は、以下のような研究成績を得た。
1、 健常成人の好中球を各種比率の細菌と混合培養した。フローサイトメトリー、光学顕微鏡、電気泳動法により好中球細胞死を測定した。また、活性酸素産生能とCD16(IgG FcレセプターIII)発現能も測定した。好中球は細菌量が少ない場合はアポトーシス優位で、細菌数が多い場合はネクローシスの形態で細胞が死んだ。細菌の混合比率が高いほど、活性酸素産生能は増強され、CD16発現能は低下した。
2、 健常成人の好中球を各種サイトカイン(TNF-α、IL-Iβ.IL-6、IL-8、GM-CSF、IL-10)と培養し、好中球細胞死を測定した。低濃度TNF-αは単独培養に比べ好中球アポトーシスを抑制、高濃度では誘導を促進した。IL-1β,IL-6、GM-CSFは好中球アポトーシスを抑制した。IL-10はIL-6の好中球アポトーシス抑制効果を減弱した。
3、 健常成人の好中球をGHで前処理、その後好中球細胞死、活性酸素産生能を測定した。GHは好中球アポトーシスを抑制した。GHは好中球活性酸素産生能も増強した。
4、 外科手術患者の末梢血を術前、術後第1-7日目に、腹腔ドレーン排液を術後1-3日目に採取し、好中球細胞死を測定した。また、好中球活性酸素産生能とCD16、TNFレセプター発現能も測定した。末梢血の好中球アポトーシスは術後1日目から術後3日目において抑制され、術後7日目には回復した。腹腔ドレーン排液中の好中球アポトーシスも術後1日目では極めて抑制され、その後に回復した。術後局所の好中球アポトーシスが抑制されているほど、活性酸素産生能が亢進していた。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1997 - 1998

【配分額】13,000千円 (直接経費: 13,000千円)

【研究分野】広領域

【研究領域課題番号】07559018 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

サイトカイン / シグナル伝達 / 造血因子 / RAS / STAT / 細胞増殖 / 細胞分化 / 細胞死 / 造血 / JAK / レトロウイルス / アポトーシス / サイトカイン受容体 / JAKキナーゼ / 転写因子 / 分化

【研究成果の概要】

本研究では、IL-3/GM-CSFにより活性化される主要なシグナル経路であるRasとSTAT5の機能解析を行うとともに、それらの変異分子の作成と発現によるシグナル経路の制御法の開発を目指した。
サイトカインによる造血細胞の細胞死の抑制にRASの活性化が重要である。そこで、部分活性型RAS変異体を用いて細胞死抑制のシグナル解析を行った。その結果、RASはRAF/MAPキナーゼ経路とP13キナーゼ経路の両方を使って細胞死を抑制していることを明かにした。また、サイトカイン除去により誘導される細胞死においても、FASなどによる誘導的な細胞死と同様にCaspase-3が活性化されること、さらに、それがサイトカイン除去に伴う細胞死に重要であることを示した。しかし、RASによる細胞死の抑制とCaspaseの活性との関連は現在検討中である。
IL-3/GM-CSFなどの造血因子がSTAT5を活性化することを見出していたが、そのサイトカイン機能における役割は不明であった。そこで、STAT5の標的遺伝子のクローニングを行い、SH2ドメインのみをもつ新規分子CIS,IL-6ファミリーのサイトカインOncostatinM(OSM)などを得た。CISはSTAT5により誘導される分子でSH2ドメインによりチロシンリン酸化された受容体などに結合してサイトカインのシグナルを抑制する負の調節分子であることを証明した。また、OSMの発現および機能の解析から、OSMは血液幹細胞が発生するaorta/gonad/mesonephros(AGM)領域での発現が認められること、AGM由来の細胞の培養系にOSMを添加することで血液の産生が著しく増加することを見い出した。さらに、この培養系では血管内皮細胞の増殖もOSMにより促進されることなどから、OSMは血管内皮と血球の共通の前駆細胞であるhemangioblastに作用する可能性が示唆された。
優勢抑制型のSTAT5変異体を作成して、STAT5の機能を検討した。IL-3依存的に増殖するBaF3細胞に優勢抑制型STAT5を発現すると、IL-3依存的な細胞増殖が有為に抑制された。この結果はSTAT5で制御されている遺伝子が細胞増殖に関与していることを示唆する。一方、赤芽球系細胞株SKT6はEPOに応答して分子しヘモグロビンを産生する。この細胞にEPO受容体の変異体および優勢抑制型のSTAT5変異体を発現することで、STAT5の活性化がEPOによる赤芽球分化において重要であることが示された。

【研究種目】基盤研究(A)

【研究期間】1995 - 1997

【配分額】7,600千円 (直接経費: 7,600千円)

【研究分野】広領域

【研究領域課題番号】07409001 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

サイトカン / サイトカン受容体 / シグナル伝達 / 造血 / アポトーシス / 分化 / RAS / STAT / サイトカイン / サイトカイン受容体 / 血管内皮 / 発生 / 誘導遺伝子 / 細胞分化 / 造血因子 / JAK / Ras / 幹細胞 / 造血細胞 / 増殖 / 細胞死 / キナーゼ / 細胞増殖

【研究成果の概要】

IL-3/GM-CSF/IL-5受容体の変異体を使ったシグナルの解析からRASとSTAT5という二つの主要なシグナル伝達経路が明らかになってきたので、これらの活性化とサイトカイン機能との関連を中心に研究を展開した。造血細胞はその増殖だけでなく、生存にもサイトカインによる刺激を必要としており、RASの活性化は造血細胞においては細胞死の抑制に重要であることを明らかにした。さらに、RASはRAF/MAPキナーゼ経路とPI3キナーゼ経路の両方を使って細胞死を抑制していること、またサイトカイン除去による細胞死にもcaspaseが関与することなどを明かにした。一方、多くのサイトカインはSTAT5を活性化するが、その生理的意義を明らかにするために、STAT5誘導性遺伝子の分離を行い、SH2ドメインをもつ新規シグナル分子CIS,IL-6ファミリーのサイトカインOncostatin M(OSM)などを同定した。CISはサイトカインのシグナルをnegativeに制御する分子であることを示した。優勢抑制型のSTAT5変異体を用いた実験から、STAT5が造血細胞の細胞あるいは赤芽球分化に重要な機能をもつことを明らかにした。さらに、STAT5とRASによるシグナル経路がクロストークすることも示した。STAT5誘導遺伝子として同定されたOSMの機能の検索を行い、胎生期での血球発生過程や生殖細胞などに作用があることを示した。また、遺伝子クローニングによりOSM受容体の分子構造も明らかにした。

【研究種目】基盤研究(A)

【研究期間】1995 - 1998

【配分額】36,500千円 (直接経費: 36,500千円)

【研究分野】泌尿器科学

【研究領域課題番号】07407046 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

進行性尿路癌 / 機能温存治療 / 転写因子抑制 / MAGE / Apoptosis / 腫瘍特異的免疫治療 / 進行尿路癌 / 膀胱癌 / 増殖活性 / 尿路上皮癌 / メトトレキセート / ビンブラスチン / G-CSF / 殺細胞効果 / 泌尿器科癌 / 増殖因子 / サイトカイン / autocrine growth / TNF / レチノインサン

【研究成果の概要】

進行泌尿器科癌の治療として、従来より各種臓器摘出を含む大量の癌細胞の除去と術前あるいは術後の抗ガン化学療法および放射線照射が現状における最も有効な抗ガン治療として選択されているのが現状である。しかしながら、これら集学的治療は正常な生理機能を犠牲にし、かつ患者に多大なる侵襲を強いるにも拘らずその最終的な治療成績は必ずしも満足し得るものではない。
このような現状にあって、これら進行泌尿器科癌の長期治療成績と術後の患者QOL(quolity of life)を考慮した際、現状において日常的に行われている治療がはたして最適な治療方法の選択であるか否か明確な結論を導き出せない。このような現実に直面して最近、最終的な患者予後に本当に寄与する最少限度の侵襲性をもって治療選択を行おうとする考えが台頭し、従来ともすれば拡大傾向にあった手術あるいは手術範囲を極力縮小したり、術後の抗ガン化学療法の適応についてもより慎重な適応がなされるべきだとする意見も少なくない。
これら縮小手術あるいは侵襲を最小限にした治療選択の目安は癌細胞自身のもつ細胞生物学的特性を充分に把握した上でその決定が成されるべきであるが、現在のところこれら指標も充分には確立されたものとはなっていない。
本研究においては、癌における腫瘍異質性および増殖性に基づく癌細胞の細胞生物学的予後因子を指標として治療方法の選択・決定を行い、予後不良群に属する症例を対象に、手術治療としては極力縮小した方法を選択し、かつ抗ガン化学療法によらない生理活性物質あるいは免疫学的手法を中心とした副作用を減弱した手法を開発し、泌尿器科進行癌の機能温存・最小侵襲性治療方法の確立を目指した。

【研究種目】基盤研究(A)

【研究期間】1995 - 1997

【配分額】22,200千円 (直接経費: 22,200千円)

【研究分野】ウイルス学

【研究領域課題番号】06807030 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

細胞傷害性T細胞 / ヘルパーT細胞 / サイトカイン / アポトーシス

【研究成果の概要】

本研究の研究実績の概要は以下の通りである。
1.マウスコロナウイルスJHM株に対するCTLの誘導にCD4^+ヘルパーT細胞が必要であるか検討した。BALB/cマウスに200μg抗CD4抗体(GK1.5)を週3回注射し、フローサイトメトリーによりCD4^+T細胞が除去されたことを確認した。このマウスにJHMウイルス10^6PFUを腹腔内接種した。感染7日後のマウス脾細胞をエフェクター細胞としてCTLアッセイを行ったところ、ウイルス感染J774.1細胞に対して細胞傷害性を示した。以上の結果より、この実験系ではCTLの誘導にCD4^+ヘルパーT細胞は必ずしも必要ないことが示唆された。
2.マウスコロナウイルスJHM株に対するCTLの誘導にどのようなサイトカインが関与しているか若干検討した。BALB/cマウスに抗IL-1レセプター抗体を投与し、そのマウスにJHMウイルスを接種し、CTLが誘導されるか検討した。その結果、感染7日後のマウス脾細胞はウイルス感染J774.1細胞に対して細胞傷害性を示した。抗IFN-γ抗体を用いて同様の実験を行ったがCTLは誘導された。しかし、抗IFN-γ抗体の生物活性が確認されておらず、結果の解釈についてはさらに検討を要すると考えられる。
3.JHMウイルス特異的CTLクローンP11Dがウイルス感染J774.1細胞を破壊する機構を知るために、CTLクローンとウイルス感染細胞を共培養し電子顕微鏡により観察した。共培養1時間後には、CTLがウイルス感染細胞に結合し、ウイルス感染細胞の核にクロマチンの凝縮および偏在が観察された。さらに時間が経過するとウイルス感染細胞が小塊(apoptotic bodies)に分断される像が観察された。電気泳動によりウイルス感染細胞のDNAフラグメンテーションが明らかとなった。CTLによってウイルス産生は抑制された。これらの結果は、CTLクローンP11Dがウイルス感染J774.1細胞のアポトーシスを誘導しウイルス産生を抑制していることを示唆している。

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1994

【配分額】1,900千円 (直接経費: 1,900千円)