【研究分野】応用動物科学

【研究領域課題番号】20380153 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

Di(n-butyl) phthalate / Di-iso-butyl phthalate / 精細胞 / アポトーシス / テストステロン濃度 / ステロイドホルモン合成酵素 / エストロゲン / エストロゲンレセプター / di(n-butyl)phthalate / di-iso-butyl phthalate / ICI 182,780 / estradiol-3-benzoate / 精巣内テストステロン / エストロゲン受容体 / 精巣内テストステロン濃度 / セルトリ細胞 / ビメンチンフィラメント / Di-n-butyl phthalate / Estrogen / Estrogen receptor / TUNEL法 / ステロイド合成酵素遺伝子 / 一日精子産生量

【研究成果の概要】

プラスティック製品の可塑剤として広く使用され、精巣毒性が知られているフタル酸エステル類に属するDi(n-butyl) phthalate(DBP)及びDi-iso-butyl phthalate(DiBP)について、その作用機序を種々の実験系を用いて検討した。その結果、DBPはエストロゲン様作用を示し、DBP投与により誘起される精細胞アポトーシスは精巣におけるエストロゲン受容体の活性化によりもたらされると考えられた。一方、DiBPによるアポトーシスはエストロゲンのそれと異なる作用経路によることが示唆された。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2008 - 2010

【配分額】18,460千円 (直接経費: 14,200千円、間接経費: 4,260千円)

【研究分野】泌尿器科学

【研究領域課題番号】11671581 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

腎細胞癌 / エストロゲンレセプター / アポトーシス

【研究成果の概要】

【目的】ヒト腎細胞癌におけるエストロゲンレセプター(ER-α、および-β)の発現と各エストロゲン製剤による増殖抑制に対する効果につき検討した。
【対象と方法】ヒト腎細胞癌株(KU19-20,KU2,Caki)を対象とした。各細胞におけるER-α、および-βの発現をRT-PCR法を用いて確認した。β-estradiol,β-estradiol-3-sulfate,diethylstilbestrol diphosphate(DESD)との96時間の混合培養の後、吸光度測定法にて細胞増殖効果を比較検討した。DESDに関しては125I標識DESDによりbinding affinityを、そしてflowcytometryによるBrdU/DNA二重染色法、さらにfragmented DNA ELISA法にてapoptosisの誘導の有無を検討した。KU19-20ではER-α、および-βの両者の発現が確認されたが、KU2ではER-αのみ、CakiではER-βのみの発現が認められた。β-estradiol-3-sulfateとの混合培養では増殖抑制効果は認められなかったが、β-estradiolでは全ての細胞で濃度依存性に増殖抑制が認められた。DESDにおいてはKU19-20,KU2のみ5〜100Mg/mlの濃度において著明な増殖抑制が認められた。またKU19-20,KU2においてはfragmented DNAの増加が観察された。DESDに対するbinding affinityの検討では全ての細胞に明らかな結合能が認められた。以上よりエストロゲン製剤は薬剤により腎細胞癌に対し異なる反応を示し、一部の腎細胞癌細胞において増殖抑制が誘導される可能性が示唆された。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】1999 - 2000

【配分額】3,600千円 (直接経費: 3,600千円)

【研究分野】循環器内科学

【研究領域課題番号】11470157 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

エストロゲン受容体 / 動脈硬化 / トランスジェニック・ラット / アデノウイルスベクター / 血管平滑筋細胞 / DNA chip / 内皮細胞 / 平滑筋細胞 / 増殖 / アポトーシス

【研究成果の概要】

本研究の目的は、エストロゲン受容体(ER)サブタイプの観点からエストロゲンの動脈硬化抑制作用を解明し、動脈硬化の新しい治療法開発へ応用することである。この3年間において最終的に以下の6つの成果をあげた。(1)糖尿病の動脈硬化への関与をERとの関連から検討し、血管平滑筋細胞で高グルコース状態がERαの発現を有意に低下させ、その機序にグルコースによるprotein kinase Cの活性亢進が関与することを示した。(2)ERαおよびERβ両方の転写機能に対してドミナント・ネガティブ効果を有する、我々が新規に開発した変異タンパクを過剰発現するトランスジェニック・ラットの作成に成功した。このラットにおいて、カフ装着による実験的動脈硬化モデルを作成し、ERの病態生理学的意義を明らかにした。(3)エストロゲンの血管平滑筋細胞の増殖を抑制する作用はERのどちらのサブタイプを介しているのかは不明であった。我々は、ERαとERβを培養血管平滑筋細胞に強制発現させる系を用い、その作用は主にERβを介していることを証明した。(4)動脈硬化の初期病変形成には、内皮細胞のアポトーシスが関連している。そこで、酸化ストレスによる血管内皮細胞のアポトーシスに対するエストロゲンの作用について検討し、エストロゲンはアポトーシスを減少させ、その機序の一部にBax蛋白の発現が関与していることを示した。(5)肥満は動脈硬化の重要な危険因子であるが、エストロゲンには肥満抑制作用がある。この機序としてのエストロゲンの中枢作用を検討し、中枢においてERβがエストロゲンの肥満抑制作用に関与していることを見いだした。(6)ERβの遺伝子上流のCA(cytosine-adenine)リピート多型と血圧の関連を、187人の健常閉経後日本人女性を対象に解析し、その中の一群において有意な収縮期高血圧が認められることを示した。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1999 - 2001

【配分額】11,800千円 (直接経費: 11,800千円)