【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1994

【研究代表者】西山 真 東京大学, 生物生産工学研究センター, 助教授 (00208240)

【キーワード】電子伝達 / 部位特異的変異 / 銅蛋白質 / 蛋白質間相互作用

【概要】我々は脱窒菌Alcaligenes faecalisS-6株の亜硝酸還元酵素への電子伝達物質として同菌より青色同蛋白質シュードアズリンを発見し、銅蛋白間での電子伝達を世界で初めて示すと共に、これら銅蛋白間の電子伝達機構についての解析を行ってきた。本研究では、亜硝酸還元酵素が保持する2種類の銅原子の中で、タイプ1銅配位子の改変体Met150Glu、タイプ2銅配位子の改変体His135Lysに対して、...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1993

【研究代表者】西山 真 東京大学, 農学部, 助手 (00208240)

【キーワード】亜硝酸還元酵素 / 蛋白工学 / 部位特異的変異 / 脱窒 / 電子伝達 (他6件)

【概要】活性汚泥から単離した脱窒菌Alcaligenes faecalis S-6株において、同菌の脱窒の一過程を担う亜硝酸還元系は、亜硝酸還元酵素(NIR)およびシュードアズリンという二つの銅蛋白によって構成されている。同様な銅蛋白による亜硝酸還元系は後になって微生物からカビにわたって広く分布することが明かとなってきた。しかしながら今までに蛋白の銅配位環境と蛋白としての機能の関係、さらには二つの銅蛋白の...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1994

【研究代表者】西山 真 東京大学, 生物生産工学研究センター, 助教授 (00208240)

【キーワード】電子伝達 / 部位特異的変異 / 銅蛋白質 / 蛋白質間相互作用

【概要】我々は脱窒菌Alcaligenes faecalisS-6株の亜硝酸還元酵素への電子伝達物質として同菌より青色同蛋白質シュードアズリンを発見し、銅蛋白間での電子伝達を世界で初めて示すと共に、これら銅蛋白間の電子伝達機構についての解析を行ってきた。本研究では、亜硝酸還元酵素が保持する2種類の銅原子の中で、タイプ1銅配位子の改変体Met150Glu、タイプ2銅配位子の改変体His135Lysに対して、...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1994

【研究代表者】西山 真 東京大学, 生物生産工学研究センター, 助教授 (00208240)

【キーワード】電子伝達 / 部位特異的変異 / 銅蛋白質 / 蛋白質間相互作用

【概要】我々は脱窒菌Alcaligenes faecalisS-6株の亜硝酸還元酵素への電子伝達物質として同菌より青色同蛋白質シュードアズリンを発見し、銅蛋白間での電子伝達を世界で初めて示すと共に、これら銅蛋白間の電子伝達機構についての解析を行ってきた。本研究では、亜硝酸還元酵素が保持する2種類の銅原子の中で、タイプ1銅配位子の改変体Met150Glu、タイプ2銅配位子の改変体His135Lysに対して、...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1993

【研究代表者】西山 真 東京大学, 農学部, 助手 (00208240)

【キーワード】亜硝酸還元酵素 / 蛋白工学 / 部位特異的変異 / 脱窒 / 電子伝達 (他6件)

【概要】活性汚泥から単離した脱窒菌Alcaligenes faecalis S-6株において、同菌の脱窒の一過程を担う亜硝酸還元系は、亜硝酸還元酵素(NIR)およびシュードアズリンという二つの銅蛋白によって構成されている。同様な銅蛋白による亜硝酸還元系は後になって微生物からカビにわたって広く分布することが明かとなってきた。しかしながら今までに蛋白の銅配位環境と蛋白としての機能の関係、さらには二つの銅蛋白の...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1993

【研究代表者】西山 真 東京大学, 農学部, 助手 (00208240)

【キーワード】亜硝酸還元酵素 / 蛋白工学 / 部位特異的変異 / 脱窒 / 電子伝達 (他6件)

【概要】活性汚泥から単離した脱窒菌Alcaligenes faecalis S-6株において、同菌の脱窒の一過程を担う亜硝酸還元系は、亜硝酸還元酵素(NIR)およびシュードアズリンという二つの銅蛋白によって構成されている。同様な銅蛋白による亜硝酸還元系は後になって微生物からカビにわたって広く分布することが明かとなってきた。しかしながら今までに蛋白の銅配位環境と蛋白としての機能の関係、さらには二つの銅蛋白の...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1993

【研究代表者】西山 真 東京大学, 農学部, 助手 (00208240)

【キーワード】亜硝酸還元酵素 / 蛋白工学 / 部位特異的変異 / 脱窒 / 電子伝達 (他6件)

【概要】活性汚泥から単離した脱窒菌Alcaligenes faecalis S-6株において、同菌の脱窒の一過程を担う亜硝酸還元系は、亜硝酸還元酵素(NIR)およびシュードアズリンという二つの銅蛋白によって構成されている。同様な銅蛋白による亜硝酸還元系は後になって微生物からカビにわたって広く分布することが明かとなってきた。しかしながら今までに蛋白の銅配位環境と蛋白としての機能の関係、さらには二つの銅蛋白の...

【研究テーマ】応用微生物学・発酵学

【研究種目】一般研究(B)

【研究期間】1990 - 1991

【研究代表者】別府 輝彦 東京大学, 農学部, 教授 (80011873)

【キーワード】アスパラギン酸プロテア-ゼ / キモシン / ムコ-ルレンニン / 蛋白工学 / 部位特異的変異 (他9件)

【概要】まず、第一にムコ-ルレンニンの酵素活性に重要な機能を果たすと思われるTyr75について新たに2種類の変異酵素を加え、合計17種類の変異酵素を取得した。部分的に配列を変えた9種類の合成基質に対して、活性を持つ2種類の変異型酵素(Y75N及びY75F)と無変異型酵素を用いて反応速度論的解析を行ったところ、変異型酵素は同様に無変異型酵素に比べてkcat/kmが大幅に低下していた。また、活性のないY75S...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】一般研究(C)

【研究期間】1993

【研究代表者】西山 真 東京大学, 農学部, 助手 (00208240)

【キーワード】亜硝酸還元酵素 / 蛋白工学 / 部位特異的変異 / 脱窒 / 電子伝達 (他6件)

【概要】活性汚泥から単離した脱窒菌Alcaligenes faecalis S-6株において、同菌の脱窒の一過程を担う亜硝酸還元系は、亜硝酸還元酵素(NIR)およびシュードアズリンという二つの銅蛋白によって構成されている。同様な銅蛋白による亜硝酸還元系は後になって微生物からカビにわたって広く分布することが明かとなってきた。しかしながら今までに蛋白の銅配位環境と蛋白としての機能の関係、さらには二つの銅蛋白の...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...

【研究テーマ】広領域

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1995 - 1997

【研究代表者】太田 博道 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30152151)

【キーワード】酵素反応 / 不斉脱炭酸反応 / 基質特異性 / ランダム変異 / 部位特異的変異 (他13件)

【概要】我々が発見した二置換マロン酸を不斉脱炭酸する酵素(AMDase)は補因子を全く必要としない非常にユニークな脱炭酸酵素であり、240個のアミノ酸からなる。4個含まれるシステインの内1個が活性部位にあって、反応に重要な役割を担っていることが明らかになっている。部位特異的変異によってこれらのシステインのうち何れか1個だけをセリンに変えた変異酵素4種類を作ってその活性をそれぞれ調べた。その結果、N端から数...

【研究テーマ】応用微生物学・応用生物化学

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】1998 - 1999

【研究代表者】松沢 洋 青森大学, 工学部, 教授 (00011966)

【キーワード】糖転移酵素 / 遺伝子発現 / コドン使用頻度 / 耐熱性酵素 / 結晶構造解析 (他14件)

【概要】Thermococcus litoralisの4-α-グルカン転移酵素は、オリゴマルトースならびにアミロースを基質にして、糖転移反応によりα-1,4-結合をもつ直鎖糖ならびに環状糖(サイクロアミロース)を生成する。本研究により以下のことが明らかになった。 1.本酵素遺伝子の大腸菌発現系では、可溶性酵素の生産量は低く、大量の封入体が蓄積する。本酵素遺伝子は大腸菌のアルギニンRare codonである...