Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

プロラクチン / ラジオレセプタ- / ラジオイムノアッセ- / レセプタ- / 固定化レセプタ- / ラジオレセプタ-アッセ- / プロラクチンレセプタ- / 標識プロラクチン

プロラクチンは、標的器官の細胞膜に存在する受容体に結合してプロラクチン刺激を伝える。shiu等は、プロラクチンが受容体に結合する親和性とプロラクチンの持つ生物活性値との問に高い相関関係があることを示した。近年になりプロラクチンの多様性が明らかになり、生物活性値も非常に異なることが明らかになった。受容体は、これらプロラクチンと結合の親和性に差があることから、ラジオイムノアッセ-の持つ欠点を解決出来るのではと考えられた。本研究では、一般に広く用いられているミクロゾ-ムの代わりに、膜タンパク質を表面活性剤を用いて可溶化し、ニトロセルロ-ス膜に固定し、バラ付きの原因を少なくすると共に、操作の容易化をはがった。トリトンXー100によりミクロゾ-ムを日溶化し、コンカナバリンAアフィニティ-クロマトにより部分精製し、ニトロセルロ-ス膜に固定した。アッセ-方法の検定は、ウシ血清を用い、内因性のプロラクチンはラジオイムノアッセ-により同時に測定し、ラジオレセプタ-と比較検討した。本方法では、標準プロラクチン0.4〜20ng/mlとで用量反応が認められ血清を16%まで加えても非特異的反応は認められなかった。又、ラジオイムノアッセ-とラジオレセプタ-アッセ-間で比較しても、ほぼ等しい値が得られ、相関係数も+0.99という高い値が得られた。ゲルロ過の結果においても、血中プロラクチンとのみ反応していることが明らかとなり、当初の目的を達成出来た。

細胞培養 / 乳腺 / コラ-ゲンゲル / 乳蛋白質 / 遺伝子 / カゼイン / プロラクチン / レセプタ- / 乳腺上皮 / カゼイン分泌 / αカゼイン / βカゼイン / 抗カゼイン抗体 / プロラクチンレセプタ- / カゼインcDNA

多数のホルモンの作用によって多種類の蛋白質を合成する乳腺の遺伝子発現系を解明するためには、無血清細胞培養系を確立するとともに、その蛋白質産物をアッセイする系を構築すること、また、乳蛋白質をコ-ドする遺伝子の転写を調べるためのプロ-プをクロ-ニングし、さらに、一ー乳蛋白質の合成を指令するプロラクチンの情報を細胞内に伝達する機構を解明するため、レセプタ-の性質を研究することが不可欠である。この目的にそって行われた本研究で、以下の成果を得た。
1. 浮遊コラ-ゲンゲンル細胞培養法によってマウス乳腺を培養し、培養液中に乳蛋白質を合成・分泌させ、カゼインをウェスタ-ンブロットにより検出した。さらに、マウスのαおよびΒカゼインをそれぞれ認識するもノクコ-ナル抗体を作った。この実験系を用いて、乳腺を最終分化させるためのホルモンはインシュリン+グルココルチコイド+プロラクチンであることが確認した。ビタミンDの分化誘導作用を検討したが、ビタミンDはグルココルチコイドにかわることができない。
2. 乳蛋白質の遺伝子のうち、ΒカゼインのcDNAおよびゲノムDNAはすでにクロ-ニングされており、酸性乳清蛋白質のcDNAもクロ-ニングされている。本研究では、αカゼインのcDNAのクロ-ニングを試みており、いくつかのクロ-ンを得ており、現在、塩基配列を分析中である。そのほかに、分子量4ー5万の乳蛋白質をコ-トするcDNAの断片とそのゲノムのDNAをクロ-ニングした。まだ、完全な同定は終わっていない。
3. 兎乳腺のプロラクチンレセプタ-を認識するモノクロ-ナル抗体を作り、これを用いて乳腺のレセプタ-を解析した。乳腺のプロラクチンレセプタ-には分子量8万と4万の2種類が存在する。ペプチドマッピングの結果、分子量4万のレセプタ-は分子量8万のレセプタ-の一部であることが明らかとなった。

【研究分担者】
青木不学	東京大学	農学部	助手	(Kakenデータベース)
河本馨	東京大学	農学部	教授	(Kakenデータベース)

【研究分担者】
青木不学	東京大学	農学部	助手	(Kakenデータベース)
酒井仙吉	東京大学	農学部	助教授	(Kakenデータベース)