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ミトコンドリア / ゲノム編集 / 植物ミトコンドリア / ミトコンドリアゲノム編集

2021年度もコロナ禍のために共同研究先への直接訪問は叶わなかった。しかしながら、昨年度に米国で開発された哺乳類ミトコンドリアゲノム編集技術一文字編集について、これを応用することで、葉緑体ゲノムの標的一文字塩基置換法を確立することができ、これを論文発表した。当該技術は韓国のグループと同着で論文掲載されたが、新聞やウェブサイトなど国内外で多数紹介してもらうことができた。この技術を新たに武器に加えて、当該国際共同研究では、植物側の（標的配列に二重鎖切断を起こすだけでなく、塩基の置換によるミスマッチを起こした時の）修復機構について解析が可能となり、こちらにもその研究対象を広げて現在も引き続き実験中である。植物ミトコンドリアゲノムについても標的一文字塩基編集が成功できており、こちらは執筆時に論文アクセプトがされており、2022年度中に論文公開される予定である。植物ミトコンドリアゲノム編集の第一世代、DNA二重鎖切断を引き起こす方法では、大規模な延期欠失とゲノム構造が変化してしまうという特徴があったが、新しい塩基置換方法は、そのような大きな変化を起こすことなく、ピンポイントに一文字だけの改変が可能であり、この点でも新しい技術と解析方法につながっている。植物ミトコンドリアゲノムについての標的切断技術、ミトコンドリアと葉緑体についての一文字編集技術は、比較的難しい技術であることもあり、さらに国内外から共同研究による実行を打診され、できる限り引き受けている。このため、当初予定を超えた共同研究数、植物の種類や対象遺伝子数が増え、また多角的な遺伝子撹乱による解析ができることから深みのある研究考察につながることで、質的にも良い方向に向かっており、2022年度も引き続き発展展開させていきたいと考えている。

ゲノム編集 / ミトコンドリアゲノム / 植物ミトコンドリア / ミトコンドリアゲノム編集 / 植物ミトコンドリアゲノム / ミトコンドリア

植物ミトコンドリアゲノムは安定的な形質転換が不可能である。ゲノム編集技術TALENを用いて、最近、ミトコンドリアゲノムの任意箇所の切断、修復、ゲノム構造変化の誘起が報告された。本研究では、よりベクター作製が簡便でDNA切断効率の高いCRISPR/Cas9法をミトコンドリアゲノム編集に適用させることに挑戦した。ミトコンドリア内のDNAを標的切断するために、Cas9タンパク質にミトコンドリアマトリクス局在シグナル配列を付加した。残念ながらこの方法ではミトコンドリアゲノム上の標的DNAの切断/変異導入/DNA消失などは認められなかったが、植物ミトコンドリアゲノム編集法の改良法の展開につながった。

細胞内には核のほかに，葉緑体とミトコンドリアの中にもゲノムが存在します．このうち植物ミトコンドリアのゲノムだけが改変が不可能でしたが，最近我々のグループによって世界で初めてゲノム編集技術TALENを応用した方法で成功しました．ミトコンドリアゲノムの改変は，基礎生物学的にも農業応用上も重要な対象です．今回の試みでは，植物ミトコンドリアゲノム編集技術を，TALENを用いた方法から，より作製方法が容易なCRISPR/Cas9法を応用して挑戦しました．この方法でのゲノム改変は残念ながら達成できませんでしたが，植物ミトコンドリアゲノム改変法の改良を進めるための手助けとなる知見が多数得られました．